產(chǎn)品描述
本品是在具有大腸桿菌BL21菌株基礎(chǔ)上制備的化學(xué)轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞，補(bǔ)充大腸桿菌缺乏的6種稀有密碼子（AUA, AGG, AGA, CUA, CCC, GGA）對(duì)應(yīng)的tRNA，提供外源基因（尤其是真核基因）在原核系統(tǒng)中的表達(dá)水平。經(jīng)pUC19質(zhì)粒檢測(cè)，轉(zhuǎn)化效率可達(dá)107 cfu/μg。
本品具有氯霉素抗性。Rosetta(DE3) Competent Cell Rosseta(DE3)感受態(tài)細(xì)胞
運(yùn)輸和保存方法
干冰運(yùn)輸。
Rosseta(DE3)感受態(tài)細(xì)胞于-80℃保存，pUC19質(zhì)粒≤-20℃保存。有效期半年。
注意事項(xiàng)
1）感受態(tài)細(xì)胞冰水浴中解凍后應(yīng)立即使用，避免反復(fù)凍融。
2）待轉(zhuǎn)化DNA加入感受態(tài)細(xì)胞后，請(qǐng)勿用移液槍吹打，輕輕彈勻即可。
3）為確保*高效率轉(zhuǎn)化，整個(gè)操作過程應(yīng)盡量輕柔，并保持低溫。Rosetta(DE3) Competent Cell Rosseta(DE3)感受態(tài)細(xì)胞
4）本品應(yīng)于-80℃保存，請(qǐng)勿將感受態(tài)細(xì)胞儲(chǔ)存于-20℃或液氮中保存。
5）整個(gè)轉(zhuǎn)化過程請(qǐng)于無菌條件下操作。
6）為了您的**和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
使用方法
1）將感受態(tài)細(xì)胞從-80℃中取出，置于冰水浴中融化。
2）將待轉(zhuǎn)化DNA加入到100 μl感受態(tài)細(xì)胞中，輕輕彈勻，冰上孵育30分鐘。
Rosetta(DE3) Competent Cell Rosseta(DE3)感受態(tài)細(xì)胞【注】：① 通常100μl感受態(tài)細(xì)胞能夠被1ng超螺旋質(zhì)粒DNA所飽和；
② 待轉(zhuǎn)化DNA加入體積不要超過感受態(tài)細(xì)胞體積的1/10。
3）42℃水浴，不要晃動(dòng)，準(zhǔn)確熱激45s后，立刻置于冰水浴中，靜置2-3分鐘。
4）向離心管中加入900 μl 不含***的LB或SOC培養(yǎng)基，混勻。
5）150 rpm, 37℃振蕩培養(yǎng)45分鐘，使菌體復(fù)蘇，抗性基因表達(dá)。
6）取適量已轉(zhuǎn)化細(xì)胞，加到含相應(yīng)***的固體培養(yǎng)基上，輕輕涂勻。剩余菌液可在4℃保存，一周之內(nèi)都可重新涂板。
【注】：如菌體量較少，也可2,500 g離心5分鐘，去掉900 μl上清。用剩余培養(yǎng)基將菌體重懸，用無菌涂布棒在含有正確抗性的平板上輕輕涂勻。
7）室溫正置10分鐘。待菌液被平板吸收后，37℃倒置培養(yǎng)過夜。Rosetta(DE3) Competent Cell Rosseta(DE3)感受態(tài)細(xì)胞
