pTrcHis B載體基本信息
| 別名: | pTrcHisB, pTrcHis B | 
|---|---|
| 質(zhì)粒類型: | 大腸桿菌蛋白表達載體 | 
| 表達水平: | 高拷貝 | 
| 啟動子: | Trc | 
| 克隆方法: | 多克隆位點,限制性內(nèi)切酶 | 
| 載體大小: | 4404 bp | 
| 5' 測序引物及序列: | pTrcHis-F: gaggtatatattaatgtatcg | 
| 3' 測序引物及序列: | pTrcHis-R: GATTTAATCTGTATCAGG | 
| 載體標簽: | N-His, N-EK | 
| 載體抗性: | Ampicillin | 
| 備注: | 
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| 產(chǎn)品目錄號: | V360-20 | 
| 穩(wěn)定性: | 瞬時表達 Transient | 
| 組成型: | 組成型 Constitutive | 
| 病毒/非病毒: | 非病毒 | 
				
			
				pTrcHis載體是來由pBR322質(zhì)粒衍生而來的表達載體,設(shè)計用來在大腸桿菌中進行重組蛋白的高效表達和純化。
載體上的Trc啟動子和rrnB抗終止區(qū)使得高水平蛋白表達成為可能.Trc啟動子由Trp啟動子的-35區(qū)域和Lac啟動子的-10區(qū)域共同組成。pTrcHis載體同時包含有一個LacIq基因,該基因編碼了Lac啟動子的抑制蛋白。LacIq基因的存在使得宿主菌是LacIq+還是LacIq-都可以高效抑制插入基因的轉(zhuǎn)錄。
進行蛋白表達時,大腸桿菌需要生長到對數(shù)生長期,然后加入1mM IPTG,去除阻遏蛋白,誘導表達。載體上的迷你順反子結(jié)構(gòu)能夠增強插入基因的轉(zhuǎn)錄水平,從而高水平表達目的蛋白。DNA插入片段位于載體表達片段下游,在其上游有一個N-端融合表達多肽序列,該序列包含有ATG起始密碼子,6xHis標簽,T7噬菌體10號基因的翻譯增強子,X press抗原表位,腸激酶酶切識別位點。