用于檢測(cè)試劑盒不知道抗原的雙抗體夾心法

ELISAS試劑盒用于檢測(cè)不知道抗原的雙抗體夾心法:
1. 包被：用0.05M PH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1～10μg/ml。在每個(gè)聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml，4℃過(guò)夜。次日，棄去孔內(nèi)溶液，用洗刷緩沖液洗3次，每次3分鐘。(簡(jiǎn)稱(chēng)洗刷，下同)。

2. 加樣：加必定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中，置37℃孵育1小時(shí)。然后洗刷。(一同做空白孔，陰性對(duì)照孔及陽(yáng)性對(duì)照孔)。

3. 加酶標(biāo)抗體：于各反應(yīng)孔中，參與新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃孵育0.5～1小時(shí)，洗刷。

4. 加底物液顯色：ELISAS試劑盒于各反應(yīng)孔中參與暫時(shí)制造的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分鐘。
 
5. 停止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中參與2M硫酸0.05ml。

6. ELISAS試劑盒效果斷定：可于白色布景上，直接用肉眼查詢(xún)效果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽(yáng)性程度越強(qiáng)，陰性反應(yīng)為無(wú)色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號(hào)標(biāo)明。也可測(cè)O·D值：在ELISA檢測(cè)儀上，于450nm(若以ABTS顯色，則410nm)處，以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔O·D值，若大于規(guī)矩的陰性對(duì)照OD值的2.1倍，即為陽(yáng)性。